小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養方法

更新更新時間：2019-12-27 瀏覽次數：2449

平滑肌即無紋肌的通稱，平滑肌是由長紡錘形的單核細胞構成。它不構成獨立的器官，而只是成為構成體壁和內臟壁的因素（肌層）。平滑肌細胞互相連接，形成管狀結構或中空器官；在功能上可以通過縮短和產生張力使器官發生運動和變形，也可產生連續收縮或緊張性收縮，使器官對抗所加負荷而保持原有的形狀。

小鼠支氣管平滑肌細胞的收縮、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過程有關．如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘發病時，可以檢測到氣管平滑肌發生數目的增生和肥大，表型也發生改變，由收縮型轉為合成型與分泌型，并分泌多種與細胞因子；而且出現向氣管腔遷移的跡象。

小鼠支氣管平滑肌細胞來源于實驗動物正常支氣管組織，長梭狀細胞，貼壁培養。通過平滑肌肌動蛋白（α-SMA）免疫熒光染色鑒定為陽性，鑒定純度高于90%，不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

（1）儀器

（2）試劑耗材

2.小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養

1) 取4-5周齡的小鼠，斷頸處死后，泡于75%的酒精中，

2) 剖開胸腔，取出完整氣管及肺組織，放入無菌PBS中，

3) 在體視顯微鏡下，小心分離出下游支氣管，

4) 用眼科剪及鑷子分離肌層并剪碎，

5) 加入0.1% I + II + IV + dispase，4℃過夜消化，

6) 第二天置于37℃水浴搖床中消化2~3h，

7) 待液體變渾濁后加入*培養基終止消化，充分吹打，

8) 過100目篩網，收集濾液，1000rpm離心5min，棄去上清，

9) 用*培養基重懸沉淀，鋪瓶。

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